Цитологическая диагностика заболеваний шейки матки

Цитологическое исследование мазков из шейки матки позволяет оценить состояние слизистой оболочки, наличие или отсутствие признаков патологических процессов (реактивных, предопухолевых, опухолей). При выявлении другими лабораторными методами инфекционного агента (вирус папилломы человека, бактериальные и паразитарные инфекции), цитологический метод позволяет оценить реакцию организма на инфекционный агент, наличие или отсутствие признаков повреждения, пролиферации, метаплазии или трансформации эпителия. Возможно также при исследовании мазка определить причину изменений эпителия (наличие воспаления с ориентировочным или уверенным определением патогенной микробиоты (микрофлоры), патологических процессов, связанных с гормональным, лекарственным, механическим, лучевым воздействием на организм женщины и шейку матки, состояний, чреватых опасностью возникновения дисплазии и рака шейки матки, а при их развитии установить правильный диагноз. В связи с этим цитологическое исследование применяют как при скрининге (мазки с визуально нормальной шейки матки), так и при наличии видимых при гинекологическом осмотре изменений слизистой оболочки.

Получение материала

Рак шейки матки чаще всего развивается в зоне трансформации, ему предшествуют фоновые процессы и внутриэпителиальные поражения (дисплазия эпителия), которые могут располагаться на небольших участках, поэтому важно, чтобы материал был получен со всей поверхности шейки матки, особенно из зоны стыка плоского и цилиндрического эпителия. Число измененных клеток в мазке бывает различным, и если их мало, то увеличивается вероятность, что патологические изменения могут быть пропущены при просмотре препарата. Для эффективного цитологического исследования необходимо учитывать:

• при профилактических осмотрах цитологические мазки следует брать у женщин независимо от жалоб, наличия или отсутствия изменений слизистой оболочки. Цитологическое исследование следует повторять не реже, чем раз в три года;
• желательно получать мазки не ранее, чем на 5-е сутки менструального цикла и не позднее, чем за 5 суток до предполагаемого начала менструации;
• нельзя брать материал в течение 48 ч после полового контакта, использования любрикантов, раствора уксуса или Люголя, тампонов или спермицидов, спринцевания, введения во влагалище медикаментов, свечей, кремов, в т. ч. кремов для выполнения ультразвукового исследования;
• беременность – не лучшее время для скрининга, так как возможны неправильные результаты, но, если нет уверенности, что женщина придет на обследование после родов, лучше мазки взять;
• при симптомах острой инфекции желательно получать мазки с целью обследования и выявления патологических изменений эпителия, этиологического агента; также необходим цитологический контроль после лечения, но не ранее, чем через 2 мес. после окончания курса.

Материал из шейки матки должен брать врач-гинеколог или (при скрининге, профилактическом осмотре) хорошо обученная медицинская сестра (акушерка).

Важно, чтобы в мазок попадал материал из зоны трансформации, так как около 90% опухолей исходит из зоны стыка плоского и цилиндрического эпителия и зоны трансформации и только 10% из цилиндрического эпителия цервикального канала.

С диагностической целью материал получают раздельно из эктоцервикса (влагалищной порции шейки матки) и эндоцервикса (цервикального канала) с помощью шпателя и специальной щетки (типа Cytobrush). При проведении профилактического осмотра используют Cervex-Brush, различные модификации шпателя Эйра и другие приспособления для получения материала одновременно из влагалищной части шейки матки, зоны стыка (трансформации) и цервикального канала.

Перед получением материала шейку матки обнажают в “зеркалах”, дополнительных манипуляций не проводят (шейку не смазывают, слизь не удаляют; если слизи много – ее аккуратно снимают ватным тампоном, не надавливая на шейку матки.). Щетку (шпатель Эйра) вводят в наружный зев шейки матки, осторожно направляя центральную часть приспособления по оси цервикального канала. Далее ее наконечник поворачивают на 360° (по часовой стрелке), достигая тем самым получения достаточного числа клеток из эктоцервикса и из зоны трансформации. Введение инструмента выполняют очень бережно, стараясь не повредить шейку матки. Затем щетку (шпатель) выводят из канала.

Лечение лейкоцитов в мазке

По результатам проведенной полноценной комплексной диагностики наш врач гинеколог индивидуально подбирает схему терапии воспалительного процесса. Именно полноценное обследование позволяет выявит истинную причину, почему в мазке много лейкоцитов и лечение в этом случае будет эффективным. Именно ЛЕЧЕНИЕ, а не подлечивание до очередного обострения, как это бывает в большинстве случаев.

Редко, но встречается ситуация, когда хорошее лечение проведено, но лейкоциты в мазке остаются повышены. Это одна из самых сложных для решения проблем. Похоже в таких случаях это связано с дисбактериозом на уровне влагалища и шейки матки. Здесь часто не помогают даже многократные курсы антибиотикотерапии, инфекции после лечения антибиотиками тоже могут не обнаруживаться. А лейкоциты в мазке повышены и держатся на высоком уровне. В подобных случаях рекомендуется периодически проводить курсы местной санации (свечи с антибактериальными компонентами) и упорно бороться за поддержание нормальной микрофлоры кишечника.

Приготовление препаратов

Перенос образца на предметное стекло (традиционный мазок) должен происходить быстро, без подсушивания и потери прилипших к инструменту слизи и клеток. Обязательно перенести на стекло материал с обеих сторон шпателя или щетки.

Если предполагается приготовление тонкослойного препарата с помощью метода жидкостной цитологии, головку щетки отсоединяют от ручки и помещают в контейнер со стабилизирующим раствором.

Фиксация мазков

выполняется в зависимости от предполагаемого метода окрашивания.

Окрашивание по Папаниколау и гематоксилин-эозином наиболее информативны в оценке изменений эпителия шейки матки; любая модификация метода Романовского несколько уступает этим методам, однако при наличии опыта позволяет правильно оценить и характер патологических процессов в эпителии и микрофлору.

Клеточный состав мазков представлен слущенными клетками, находящимися на поверхности эпителиального пласта. При адекватном получении материала с поверхности слизистой оболочки шейки матки и из цервикального канала в мазок попадают клетки влагалищной порции шейки матки (многослойный плоский неороговевающий эпителий), зоны стыка или трансформации (цилиндрический и, при наличии плоскоклеточной метаплазии, метаплазированный эпителий) и клетки цервикального канала (цилиндрический эпителий). Условно клетки многослойного плоского неороговевающего эпителия принято делить на четыре типа: поверхностные, промежуточные, парабазальные, базальные. Чем лучше выражена способность эпителия к созреванию, тем более зрелые клетки попадают в мазок. При атрофических изменениях на поверхности эпителиального пласта расположены менее зрелые клетки.

Физиологический лейкоцитоз

Связан с перераспределением лейкоцитов, они переходят из пристеночного пула (запаса) в общий кровоток.

К физиологическим видам лейкоцитоза относятся:

• Пищеварительный. Через 2-3 часа после приема пищи лейкоциты выбрасываются из депо в кровь, а она приливает к органам ЖКТ для лучшего переваривания. Иммунные клетки необходимы подслизистому слою желудка и кишечника для защиты, так как с пищей в организм попадают микроорганизмы, содержащиеся в воздухе, воде и на продуктах.
• Миогенный (мышечный). Интенсивная работа мышц запускает каскад реакций, стимулируя работу всех органов, тканей и клеток. Во время и после физической активности количество лейкоцитов может превышать норму в 3-5 раз.
• Повышенные лейкоциты при беременности – это необходимая мера защиты организма матери от попадания в кровь инфекции. Если в I триместре лейкоцитоз относителен, но к III триместру лейкоциты превышают норму уже в 2 раза и это не считается патологией. Кроме того, лейкоциты участвуют в стимуляции сокращения матки во время родов.
• В первые 2-3 дня жизни повышенные лейкоциты у ребенка – это норма. Во время беременности плод защищает иммунная система матери. После рождения в его кровь из депо активно выбрасываются все форменные элементы. Лейкоциты необходимы для защиты организма ребенка от агрессивной внешней среды.
• Болевой. При раздражении рецепторов боли сужаются сосуды, повышается давление и уровень адреналина. Это реакция стресса, в ответ на которую лейкоциты перераспределяются и из пристеночного запаса выбрасываются в кровь, приводя к кратковременному лейкоцитозу.
• Стресс. Эмоциональные всплески вызывают изменения в сосудах, гормональные скачки, повышение АД и ЧСС. В ответ на это в крови повышается количество лейкоцитов, как при болевом раздражении.

При физиологическом лейкоцитозе отмечается небольшое повышение количества лейкоцитов без изменений в лейкоформуле (соотношений всех 5 фракций лейкоцитов). Это явление кратковременное и безвредное.

Интерпретация результатов цитологического исследования

Наиболее распространенная в настоящее время – классификация Bethesda (The Bethesda System), разработанная в США в 1988 г, в которую вносили несколько изменений. Классификация создана для более эффективной передачи информации из лаборатории врачам клинических специальностей и обеспечения стандартизации лечения диагностированных нарушений, а также последующего наблюдения за больными.

В классификации Bethesda выделяют плоскоклеточные интраэпителиальные поражения низкой и высокой степени (squamous intraepithelial lesions of low grade and high grade – LSIL и HSIL) и инвазивный рак. Плоскоклеточные интраэпителиальные поражения низкой степени включают изменения, связанные с папилломавирусной инфекцией и слабой дисплазией (CIN I), высокой степени – умеренную дисплазию (CIN II), тяжелую дисплазию (CIN III) и внутриэпителиальный рак (cr in situ). В этой классификации имеются также указания на специфические инфекционные агенты, вызывающие заболевания, передавае мые половым путем.

Для обозначения клеточных изменений, которые трудно дифференцировать между реактивными состояниями и дисплазией предложен термин ASCUS – atypical squamous cells of undetermined significance (клетки плоского эпителия с атипией неясного значения). Для клинициста этот термин мало информативен, однако он нацеливает врача на то, что данная пациентка нуждается в обследовании и/или в динамическом наблюдении. В классификацию Bethesda в настоящее время введен также термин NILM – no intraepithelial lesion or malignancy, объединяющий норму, доброкачественные изменения, реактивные изменения.

Так как данные классификации используются в практике врача-цитолога, ниже приведены параллели между классификацией Bethesda и классификацией, распространенной в России (Табл. 22). Цитологическое стандартизованное заключениепо материалу из шейки матки (форма № 446/у), утверждено приказом Минздрава России от 24.04.2003 № 174.

Причины получения неполноценного материала различны, поэтому цитолог перечисляет типы клеток, обнаруженные в мазках и по возможности указывает причину, по которой материал признан неполноценным.
Цитологические изменения в железистом эпителии

* при возможности ASCUS должны быть определены как сходные с реактивными, репаративными или предраковыми процессами;

** изменения, связанные с воздействием вируса папилломы человека, ранее обозначаемые как койлоцитоз, койлоцитарная атипия, кондиломатозная атипия, включены в категорию слабо выраженных изменений клеток плоского эпителия;

*** по возможности следует отметить, относятся ли изменения к CIN II, CIN III, есть ли признаки cr in situ;

**** гормональная оценка (проводится только по вагинальным мазкам): – гормональный тип мазка соответствует возрасту и клиническим данным; – гормональный тип мазка не соответствует возрасту и клиническим данным: (расшифровать); – гормональная оценка невозможна в связи с: (указать причину).

Роль этнической принадлежности

Около половины женщин, принимавших участие в исследовании были латиноамериканского происхождения, а остальные – нет. Авторы приводят доказательства более высокого уровня заболеваемости раком шейки матки у латиноамериканских женщин. Они стремились обнаружить любые этнические факторы, которые могут лежать вне «отсутствия скрининга» или «неравного доступа к здравоохранению».

Были найдены некоторые данные, которые говорят в пользу этого. Например, у латиноамерикансктх женщин, принимавших участие в исследовании, в большей степени имели низкий уровень вагинальных популяций Lactobacillus и более высокие популяции бактерий Sneathia.

Возможно, это говорит о том, что различный состав вагинальной микрофлоры у латиноамериканских женщин может быть потенциальным фактором риска развития рака шейки матки у этой популяции.

Интеграция различных лабораторных методов

В диагностике заболеваний шейки матки важное значение имеют клинические данные, результаты исследования на микрофлору (классические микробиологические (культуральные), методы АНК (ПЦР, RT-PCR, Hybrid Capture, NASBA, и др.).

При необходимости уточнения патологического процесса (ASC-US, ASC-H) цитологическое исследование по возможности дополняют молекулярно биологическими (p16, онкогены, метилированная ДНК и др.).

Исследования для обнаружения ВПЧ имеют низкую прогностическую значимость, особенно у молодых женщин (до 30 лет), в связи с тем, что у большинства пациенток этой возрастной группы ВПЧ-инфекция имеет транзиторный характер. Однако несмотря на низкую специфичность теста в отношении интраэпителиальных опухолей и рака, именно у женщин моложе 30 лет он может использоваться в качестве скринингового с последующим цитологическим исследованием. Чувствительность и специфичность значительно увеличиваются при комплексном использовании цитологического метода и исследования для обнаружения ВПЧ, особенно у больных с сомнительными цитологическими данными. Этот тест важен при ведении пациенток с ASC-US, при динамическом наблюдении для определения риска рецидива или прогрессирования заболевания (CIN II, СIN III, carcinoma in situ, инвазивный рак).

Как связаны вагинальная микрофлора и рак шейки матки?

Инфицирование определенными штаммами вируса папилломы человека (ВПЧ) – давно известный фактор риска развития рака шейки матки.

Однако, ученые из Университета Аризоны (Феникс) предполагают, что есть и другие факторы, которые влияют на состояние шейки матки.

В статье, опубликованной в журнале Scientific Reports, говорится, что было обнаружено, что пациентки с раком или предраком шейки матки имеют разный состав вагинальной бактериальной флоры по сравнению с женщинами, у которых не было изменений состояния шейки матки.

Предполагается, что есть прямая связь между полезными бактериями и здоровой шейкой матки, а также вредными бактериями и различными патологиями и повышенным риском развития рака шейки матки.

У пациентов с раком и предраком», – объясняет старший автор исследования Мелисса М. Хербст-Краловец, которая является доцентом в Медицинском колледже Университета Аризоны, «лактобациллы – хорошие бактерии – заменены смесью плохих бактерий.

Виды лейкоцитов

Лейкоциты делятся на две большие группы:

• зернистые, для которых характерно наличие крупного сегментированного (разделенного на части) ядра и гранул в цитоплазме (основная полужидкая масса клетки, её внутренняя среда). Их ещё называют гранулоцитами.
• незернистые, у которых в цитоплазме (внутренней среде клетки) нет специфических гранул. Второе их название – «агранулоциты».

В каждой группе есть свои виды лейкоцитов. Они отличаются по структуре, внешнему виду, свойствам и функциям.

Зернистые лейкоциты:

• Нейтрофилы.
• Эозинофилы.
• Базофилы.

Незернистые лейкоциты:

• Лимфоциты.
• Моноциты.

Подробно рассмотрим каждую подгруппу.

Нейтрофилы

Они первыми прибывают в очаг поражения – в места, где были повреждены ткани и/или куда проникли микроорганизмы.

Главная задача нейтрофилов – захватить и переварить микроорганизмы (бактерии и вирусы).

Резкое повышение нейтрофилов в крови (нейтрофилия) указывает на острый воспалительный процесс, предположительно вирусной природы. Чаще всего увеличивается доля незрелых форм – юных и палочкоядерных.

Эозинофилы

Лейкоциты с выраженной зернистостью цитоплазмы (внутренней среды клетки).

Главная задача эоизнофилов – уничтожение паразитов и участие в аллергических реакциях.

Повышение эозинофилов в крови называется эозинофилией. Ее наличие говорит о присутствии паразитарного, аллергического (системная красная волчанка, ревматоидный артрит) или онкологического (эозинофильная лейкимия, болезнь Ходжкина) заболевания. Кроме того, эозинофилия характерна для бронхиальной астмы.

Базофилы

Самая малочисленная популяция лейкоцитов с мелкой зернистостью.

Основная задача базофилов – выделение гистамина, необходимого для воспалительного процесса и аллергической реакции.

Увеличение содержания базофилов в крови называется базофилией.

Базофилия указывает на повышенную чувствительность иммунной системы, что характерно при аллергических реакциях. Например, при крапивнице или сывороточной болезни.

Лимфоциты

Незернистые лейкоциты с крупным округлым ядром. По величине делятся на большие, средние и малые.

Есть 3 вида лимфоцитов:

• Т-лимфоциты. Главные компоненты клеточного иммунитета. Уничтожают чужеродные частицы, направляют и регулируют активность других иммунных клеток и тормозят излишний иммунный ответ.
• В-лимфоциты. Участвуют в гуморальном иммунитете. Распознают чужеродные структуры (антигены) и вырабатывают защитные белки (антитела) для их уничтожения.
• NK-лимфоциты. Уничтожает пораженные бактериями и вирусами клетки, а также опухолевые клетки.

Основная задача лимфоцитов – обеспечивать специфический иммунный ответ.

Повышение лимфоцитов в крови называют лимфоцитозом. Он характерен при острых инфекциях и заболеваниях крови (лейкозы).

Моноциты

Самые крупные лейкоциты. Не имеют зернистости, есть крупное ядро.

Моноциты – макрофаги, клетки, способные поглощать и переваривать крупные твердые частицы. После фагоцитоза макрофаги, как правило, не погибают.

Главная задача моноцитов – «зачистить» очаг поражения от поврежденных или погибших клеток и микроорганизмов.

Повышение моноцитов (моноцитоз) встречается при инфекциях, заболеваниях крови, онкозаболеваниях, после оперативного вмешательства и на период выздоровления.